在進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中，相信大家都有這樣的經(jīng)歷：實(shí)驗(yàn)規(guī)劃恨不得精細(xì)到每小時(shí)，甚至連哪天出數(shù)據(jù)都預(yù)估好了。

But......

理想很豐滿，現(xiàn)實(shí)往往很骨感！

“隔壁王師兄的細(xì)胞都能傳代了，我的這細(xì)胞，咋長(zhǎng)得這么慢呢？"

所以今天，我們就來(lái)聊聊，細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢（異常情況的慢，一些特殊細(xì)胞不在討論范圍內(nèi)）的可能原因。

原因很復(fù)雜，可以總結(jié)為以下幾點(diǎn)，如果小伙伴們有更多觀點(diǎn)，歡迎補(bǔ)充

細(xì)胞可能存在污染

各類細(xì)胞污染

都有可能導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢

如果培養(yǎng)體系，不小心被細(xì)菌、真菌、支原體污染，都會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞因缺乏營(yíng)養(yǎng)而出現(xiàn)生長(zhǎng)緩慢的現(xiàn)象。

細(xì)菌污染發(fā)展迅速，一般會(huì)出現(xiàn)培養(yǎng)基渾濁、變黃的現(xiàn)象；真菌污染**辨認(rèn)，顯微鏡下可見絲狀菌體（有些甚至嚴(yán)重到肉眼可見）；而支原體污染往往防不勝防，顯微鏡下也很難捕捉到它的身影。支原體污染的典型特征是培養(yǎng)基提前變黃、細(xì)胞生長(zhǎng)受阻，后期細(xì)胞大量死亡等。

因此，如果細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，首先要考慮細(xì)胞是否存在污染。并做相應(yīng)的處理。具體處理方法見以下幾篇文章：

細(xì)胞培養(yǎng)中的污染監(jiān)控與檢測(cè)——細(xì)菌

細(xì)胞培養(yǎng)中的污染監(jiān)控與檢測(cè)——真菌

細(xì)胞培養(yǎng)中的污染監(jiān)控與檢測(cè)——支原體

培養(yǎng)體系有瑕疵

沒有根據(jù)細(xì)胞特性調(diào)整培養(yǎng)體系

細(xì)胞的體外培養(yǎng)，依賴于完quan培養(yǎng)基的支持與保護(hù)。有些小伙伴拿到一株陌生的細(xì)胞，沒有將培養(yǎng)體系研究清楚就開始實(shí)驗(yàn)，由于培養(yǎng)環(huán)境的改變，導(dǎo)致細(xì)胞一時(shí)無(wú)法適應(yīng)，而出現(xiàn)生長(zhǎng)受阻甚至停滯的狀態(tài)。

當(dāng)我們排除了細(xì)胞污染的情況后，就要考慮培養(yǎng)體系是否合理了：培養(yǎng)基種類、品牌是否進(jìn)行過(guò)更換？血清類型是否用錯(cuò)等等，盡可能保證與原培養(yǎng)條件一致，如果要更換，也要循序漸進(jìn)。

細(xì)胞初始狀態(tài)較差

細(xì)胞長(zhǎng)得慢

很可能不是你的鍋

可能最一開始復(fù)蘇的細(xì)胞，就被污染/活力不足。因此，建議大家再?gòu)?fù)蘇一管同種細(xì)胞（**不是同批次凍存的），與現(xiàn)有細(xì)胞進(jìn)行比較，觀察長(zhǎng)勢(shì)。

公共設(shè)備可能存在問(wèn)題

儀器的參數(shù)

也會(huì)影響細(xì)胞狀態(tài)

如果細(xì)胞不存在污染，培養(yǎng)體系沒有瑕疵、細(xì)胞初始狀態(tài)也沒有問(wèn)題，那么可以考慮公共儀器設(shè)備是否存在紕漏。

最常見有水浴鍋溫度、室內(nèi)溫度及濕度、培養(yǎng)箱參數(shù)、水浴鍋溫度等。

水浴鍋是細(xì)胞培養(yǎng)室常用的儀器，要定期用溫度計(jì)對(duì)其工作溫度進(jìn)行檢查，觀察是否存在溫度不準(zhǔn)、溫度驟變的情況。另外要強(qiáng)調(diào)一點(diǎn)，水浴鍋也是常見的污染源之一，水浴鍋中的水**使用無(wú)菌水，并定期做好清潔工作，推薦大家使用MB WaterShield，可以有效清除、預(yù)防水槽中的支原體，方便安全、省時(shí)省力省心。

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室的溫度及濕度：儀器還是操作對(duì)溫度沒有特殊要求，維持舒適的溫度即可，比如18~26℃；過(guò)高的濕度會(huì)導(dǎo)致微生物的滋生，所以建議正常維持濕度在70%以下。應(yīng)定期用溫度濕度測(cè)試儀對(duì)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)，以防溫控系統(tǒng)出現(xiàn)故障。

培養(yǎng)箱參數(shù)：一般哺乳類與禽類細(xì)胞在體外培養(yǎng)的適宜溫度是37～38℃；大多數(shù)細(xì)胞適宜的pH范圍往往是7.2～7.4。在開放式培養(yǎng)中，以5%的二氧化碳?xì)怏w比例為宜。但在實(shí)際操作過(guò)程中，細(xì)胞培養(yǎng)箱有可能會(huì)出現(xiàn)以下故障，影響細(xì)胞培養(yǎng)體系，進(jìn)而使細(xì)胞生長(zhǎng)變得緩慢：

溫度和溫度設(shè)定不準(zhǔn)；

細(xì)胞培養(yǎng)箱濕度不能維持；

細(xì)胞培養(yǎng)箱的二氧化碳濃度不準(zhǔn)。

對(duì)應(yīng)解決方法給大家整理好，建議大家保存，以備不時(shí)之需。

實(shí)驗(yàn)人員可能發(fā)生變化

細(xì)胞“飼養(yǎng)員"的更換

也可能影響細(xì)胞生長(zhǎng)速率

作為一名合格的細(xì)胞“飼養(yǎng)員"，一定要預(yù)先了解所養(yǎng)細(xì)胞的“習(xí)性"：用哪種培養(yǎng)法、使用何種類型培養(yǎng)體系（血清種類、基礎(chǔ)培養(yǎng)基類型、是否添加生長(zhǎng)因子以及抗生素等），盡可能還原初始的培養(yǎng)環(huán)境，讓細(xì)胞有個(gè)適應(yīng)的過(guò)程。另外，實(shí)驗(yàn)者自身也要注意操作規(guī)范，按照標(biāo)準(zhǔn)流程培養(yǎng)。

實(shí)驗(yàn)試劑可能發(fā)生改變

培養(yǎng)用的試劑

也可能會(huì)是影響因素

不同品牌的試劑可能會(huì)有些許差別，對(duì)于一些比較嬌貴的的細(xì)胞，這些細(xì)微的差別很可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)受到影響。因此我們一直強(qiáng)調(diào)大家“追本溯源"，盡可能用與原來(lái)一致的培養(yǎng)條件。

如果要更換試劑，建議大家先做個(gè)對(duì)照試驗(yàn)，看看新的試劑對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有沒有影響。

另外，除了以上這六點(diǎn)，還有一點(diǎn)需要特別注意，就是：

細(xì)胞的代次

一般來(lái)說(shuō)，細(xì)胞傳代次數(shù)是一定的（一些癌細(xì)胞系屬于特例），特別是像間充質(zhì)干細(xì)胞這類對(duì)代次比較敏感的細(xì)胞，需要格外注意，傳代次數(shù)過(guò)高后（10-15代左右），細(xì)胞生長(zhǎng)速率也會(huì)明顯減慢。在實(shí)驗(yàn)時(shí)，盡量選擇代次較低且狀態(tài)穩(wěn)定的細(xì)胞。