人類誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（hiPSC）是一類通過基因編輯技術(shù)（如CRISPR-Cas9）對已經(jīng)高度分化的人體細(xì)胞進(jìn)行重新逆分化得到的多能性干細(xì)胞。這類細(xì)胞具有自我更新和分化成多種細(xì)胞類型的能力，為科學(xué)家在疾病模型構(gòu)建、藥物篩選及再生醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域提供了強大的工具。

hiPSC的培養(yǎng)方法

hiPSC的培養(yǎng)過程復(fù)雜且需要精細(xì)操作，但現(xiàn)代技術(shù)的發(fā)展已經(jīng)大大簡化了這一過程。以下是hiPSC培養(yǎng)的基本步驟：

試劑準(zhǔn)備：首先，需要配制hESC/iPSC培養(yǎng)基，并準(zhǔn)備Matrigel鋪板，為細(xì)胞提供一個適宜的生長環(huán)境。

細(xì)胞復(fù)蘇：將冷凍的hiPSC細(xì)胞在37℃水浴鍋中解凍，然后移入含有培養(yǎng)基的離心管中，離心去除上清液后，用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，接種到Matrigel包被的培養(yǎng)板上。

細(xì)胞培養(yǎng)：將接種好的細(xì)胞置于37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每天更換新鮮培養(yǎng)基，并根據(jù)細(xì)胞生長情況調(diào)整培養(yǎng)基體積。

細(xì)胞傳代：當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到85%左右時，需要進(jìn)行傳代操作。使用特定的消化液將細(xì)胞從培養(yǎng)板上分離下來，重懸后按一定比例接種到新的培養(yǎng)板上。

細(xì)胞凍存：對于暫時不需要使用的細(xì)胞，可以將其凍存起來以備后用。

實驗應(yīng)用

hiPSC在多種實驗研究中發(fā)揮著重要作用，以下是幾個典型的例子：

疾病模型構(gòu)建：通過基因編輯技術(shù)，可以在hiPSC中引入特定的基因突變，從而構(gòu)建出與某種疾病相關(guān)的細(xì)胞模型。這些模型可以用于研究疾病的發(fā)病機制、評估治療效果等。

藥物篩選：利用hiPSC分化出的特定細(xì)胞類型，可以模擬藥物在人體內(nèi)的作用過程，從而篩選出具有潛在療效的藥物。這種方法可以大大縮短藥物研發(fā)周期，降低研發(fā)成本。

再生醫(yī)學(xué)：hiPSC具有分化成多種細(xì)胞類型的能力，因此在再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。通過誘導(dǎo)hiPSC分化成特定類型的細(xì)胞，可以用于修復(fù)受損組織或器官，實現(xiàn)疾病的治愈。

具體實驗案例

以研究非典型甲狀腺激素信號傳導(dǎo)為例，研究人員利用CRISPR-Cas9技術(shù)構(gòu)建了THRB基因突變的hiPSC細(xì)胞系。這些細(xì)胞系可以用于研究THRB信號通路的激活作用，以及這種作用在甲狀腺激素生理效應(yīng)中的貢獻(xiàn)。通過這種方法，研究人員可以深入了解甲狀腺激素信號傳導(dǎo)的分子機制，為相關(guān)疾病的治療提供新的思路。

此外，研究人員還利用hiPSC構(gòu)建了BAX/BAK雙敲除的細(xì)胞系，用于研究腦缺血等細(xì)胞凋亡相關(guān)疾病的發(fā)病機制與治療干預(yù)機制。這些細(xì)胞系具有典型的形態(tài)和未分化狀態(tài)的標(biāo)記，并且已經(jīng)通過基因技術(shù)驗證了BAX/BAK基因的敲除效果。

結(jié)論

hiPSC作為一類具有廣泛應(yīng)用前景的多能性干細(xì)胞，在疾病模型構(gòu)建、藥物篩選及再生醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步和完善，hiPSC的培養(yǎng)和應(yīng)用將更加簡便和高效，為科學(xué)研究和臨床治療帶來更多的可能性。